К 1941 году Т-35 по строгим советским стандартам морально устарели, однако с вооружения сняты не были. На 22 июня 1941 года в РККА числилось 48 танков Т-35, состоявших на вооружении 67-го и 68-го танковых полков 34-й танковой дивизии Киевского ОВО. Остальные находились в распоряжении военных учебных заведений и в ремонте (2 танка — ВАММ, 3 — 2-е Саратовское БТУ, 1 — Казанские БТКУТС, 5 — в ремонте на заводе № 183). Все Т-35, имевшиеся в распоряжении 34-й тд, к началу войны находились в районе Равы-Русской и были потеряны в первые дни боёв. При этом лишь 7 машин были потеряны непосредственно в бою, 6 на момент начала войны были в ремонте, а другие 35 выбыли из строя в результате неисправностей, сломались на марше и были брошены или уничтожены экипажами. Последнее применение танков Т-35 (2 машины) отмечено во время битвы под Москвой.